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2021-01-05 09:39:22
血常规、x线检查、直接涂片镜检、快速抗原检测、衣原体分离、血清学检全、PcR技术是目前诊断衣原体感染较为常用的方式。专家指出,取尿道分泌物、阴道分泌物作支原体培养才是检测衣原体感染与否最可信的方法。
支原体感染检查项目有哪些?
1、解脲脲原体DNA提取:将宫颈管内或尿道内刮取物置含0.5%NP-40、0.5%Tween20,1%SDS和2mg/ml蛋白酶K的TES缓冲液(50mmol/L Tris-HCl,50mmol/L NaCl,100mmol/ L EDTA,pH 8.0),置37℃裂解60 min,沸水5min,酚,氯仿抽提DNA乙醇沉淀,沉淀物溶于20μl TE缓冲液(100mmol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA,pH 8.0)。
2、扩增产物的检测:1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。取10u l PCR扩增物作1.5%琼脂糖凝胶电泳、0.5μg/ml溴化乙锭染色,以PGEM-3Zf(+)DNA-Hae Ⅲ为分子量标准,置紫外透射仪观察结果。
3、PCR扩增:传统的方法为的反应体积为100μl,含5x反应缓冲液20μl和FD-DNA聚合酶2μ、4种dNTP各200μmol/L以及引物对各 25pmol/L。上述成分预先一次性分装于0.5ml离心管,-20℃备用。临用加模板DNA 2μl,短暂离心,加100μl矿物油覆盖。现在试剂已商品化,反应体积为25μl,单管已分装好,只要加入模板DNA即可。置DNA扩增仪进行40次循环扩增。每次循环包括90℃变性45s(第一次循环变性2min),55℃退火30s和72℃延伸40s(最后一次循环72℃,延伸5min)三个步骤。每次扩增均应作阴阳性对照。
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